看完本文,了解一下羅丹明123的的染色程序
瀏覽次數:78發布日期:2022-09-20
羅丹明123是一種可以通過細胞膜的選擇性染色活細胞線粒體的熒光染料,呈黃綠色熒光。廣泛用作檢測線粒體膜電位,也常用于細胞凋亡檢測。它可以快速通過細胞膜,僅需幾分鐘就可以被具有活性的線粒體所俘獲,并且對細胞沒有任何毒性。
羅丹明123用于對許多種細胞進行染色,包括植物細胞和細菌。由于細胞內ATP的量與Rh123的熒光強度之間有相關性,因此Rh123被應用于檢測細胞內的ATP。Rh123還用于癌癥研究。
羅丹明123的染色程序:
(1)將0.4mgRh123溶解到1mLDMSO中制備成1mMRh123-DMSO溶液。
(2)用載玻片準備細胞。細胞數目應為5×104~5×105個/mL。
(3)孵育該載玻片,用PBS或Hank's液洗滌細胞。
(4)用培養基稀釋1mMRh123溶液以制備1~20µMRh123緩沖液。
(5)將Rh123緩沖液加入載玻片并在37℃下孵育30分鐘至1小時。
(6)去除Rh123緩沖液并用培養基洗滌細胞(洗滌細胞后為了固定,加入10%福爾馬林緩沖液并孵育15~20分鐘,接著用PBS洗滌)。
(7)用帶有熒光素濾光片的熒光顯微鏡觀察細胞。
儲存條件:室溫避光保存,溶于DMSO配制成母液后-20℃保存。